微生物能力验证样品制备工艺及水产品企业水平测试结果评价

为了提高舟山市水产品企业实验室微生物检测能力,保证企业自检结果准确可靠,根据舟山市进出口检验检疫工作的特点,选取了水产品中3个常规的微生物检测项目,即菌落总数、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌检测,采用了真空冷冻干燥技术制备一系列微生物能力验证样品,对舟山市88家水产品企业的实验室进行微生物能力验证。结果表明采用本工艺制备的能力验证样品具有稳定性好、贮存方便、保存期长等优点。从水产品企业微生物水平测试结果来看,菌落总数项目的满意率为81.8%;副溶血弧菌检测的正确率为93.8%,而金黄色葡萄球菌检测的正确率为82.1%。检测结果存在偏差的主要原因是检测中未使用标准菌株进行参照、试剂在使用前无进行质量核查、对某些生化反应判断失误等。     

氯霉素对费氏弧菌0~24 h的Hormesis 效应及其机制初探

为了探究抗生素对发光菌的Hormesis效应,选择费氏弧菌(Vibrio fischeri,V.fischeri)为受试生物,氯霉素为研究对象,测定了0~24h下氯霉素对V.fischeri的发光强度(Hv)及生长量(OD_(600))的作用,探讨氯霉素对V.fischeri的低浓度促进效应及其可能机制.结果表明,氯霉素对V.fischeri的发光强度具有明显的促进作用,且仅出现在细菌生长的延滞期.根据V.fischeri的发光机制,结合Gaussian量子化学计算结果,即氯霉素的最正氢电荷为0.244,远大于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的最正氢电荷0.135,提出氯霉素通过提供质子促进荧光反应,进而产生Hormesis效应的可能机制.     

Overexpression and export of Vibrio anguillarum metalloprotease in Escherichia coil

Vibrio anguillarum metalloprotease, an extracellular zinc metalloprotease involved in the virulence mechanism of Vibrio anguillarum, is synthesized from the empA gene as a 611-residue precursor and naturally secreted via Sec secretion pathway in Vibrio anguillarum. In this study, hetemlogous expression of the empA gene encoding metallopmtease and export of the recombinant metallopmtease in Escherichia coli were examined. The empA gene was subcloned into pBAD24 with arabinose promoter and sequenced. The sequence encoded a polypeptide （611 amino acids） consisting of four domains： a signal peptide, an Nterminal pmpoptide, a mature region and a C-terminal pmpoptide. The empA gene inserted in plasmid pBAD24 was overexpressed in TOP10 strain of E. coli after arabinose induction. The 36kDa polypeptide of the recombinant metallopmtease as the mature pmtease was further confirmed by SDS-PAGE and im- munoblotting. It was found that recombinant metallopmtease with the EmpA activity and antigenicity was exported into the poriplasm of Escherichia coli cells via Sec translocation pathway, whereas it was secreted into extracellular environments in V. anguillarum. The results imply that the expression, export and processing mechanism of the protein in E. coli are similar to those in V. anguillarum.     

海洋细菌 Aeromonas hydrophila和Vibrio vulnificus对单萜柠檬烯的生物转化产物分析

研究了南海海洋细菌嗜水性气单胞菌Aerom onas hydrophila(5-213)和创伤弧菌Vibrio vulnificus(13-203)在培养基中添加单萜(D)-柠檬烯后提取产物的组成变化情况。经GC-MS分析发现该两细菌对(D)-柠檬烯有显著的生物催化转化作用,能对底物进行不同程度的氧化、还原、水解、酯化、开环等反应,并产生丰富的系列结构不同的其它萜类化合物:包括单萜、倍半萜、二萜、以及三萜等。通过单萜微生物转化和生物合成必将获得新的活性萜类产品,也为丰富的天然单萜资源的开发与利用提供新的途径和方法。     

拮抗菌对病原性溶藻弧菌粘附大黄鱼鳃粘液的影响

用3H-TdR同位素标记方法研究了分离自患病大黄鱼的溶藻弧菌和健康大黄鱼的7株拮抗菌对大黄鱼鳃粘液的粘附动力学以及拮抗菌对溶藻弧菌粘附的影响,试验结果表明:溶藻弧菌和7株拮抗菌对大黄鱼鳃粘液的粘附都属于饱和粘附;溶藻弧菌对大黄鱼鳃粘液的最大粘附量为4.1×105cells/well,7株拮抗菌的最大粘附量和亲和指数都高于溶藻弧菌;各菌株的分离常数都高于自身的最大粘附量,总体上呈现最大粘附量高的菌株其分离常数也大的趋势.7株拮抗菌在置换条件下都能显著降低溶藻弧菌对鳃粘液的粘附量,在竞争条件下有5株能够显著降低溶藻弧菌的粘附量,在排斥条件下仅有3株能够显著降低溶藻弧菌的粘附.结果表明:病原性溶藻弧菌对大黄鱼鳃粘液有较强的粘附作用;7株拮抗菌能够抑制溶藻弧菌的粘附,其中置换作用效果最好,排斥作用效果最差;拮抗菌和病原菌的粘附动力学特征可在一定程度上反映它们的相互作用效果,但是仅仅根据各菌株自身的粘附动力学特性无法推断其对病原菌粘附的抑制能力.     

养殖大黄鱼细菌性疾病的病原研究

从患病大黄鱼体内分离到二株病原菌，经人工感染试验及菌种鉴定研究，认为致病菌为熔藻弧菌Vibrio algi-nolyticus。药敏实验结果表明：磺胺 TMP、氯霉素、环丙沙星、呋喃妥因等对致病菌有较强的抑制作用。     

鲑点石斑鱼细菌病原的分离鉴定和致病性

对海南省三亚地区网箱养殖的发病鲑点石斑鱼 (Epinephelusfario)进行病原分离 ,通过常规细菌学鉴定和应用ATB半自动鉴定系统及VITEK_AMS_6 0自动微生物鉴定系统 ,并与有关的标准菌株为对照 ,鉴定为溶藻弧菌 (Vibrioalginolyticus)。小鼠毒性实验和不同方式感染鲑点石斑鱼实验的结果表明 ,该菌对小鼠有极强的毒力 ,不同感染方式感染鲑点石斑鱼表现不同程度的致病性。同时测定了溶藻弧菌对小鼠和鲑点石斑鱼的LD50 分别为 3 2× 10 5个 /mL和 2 1× 10 7个 /mL。进一步比较溶藻弧菌对青石斑鱼 (Epinephelusowoara)、真鲷 (Pagrosomusmajor)、平鲷 (Rhabdosargussarba)、黑鲷 (Sparusaurata)、红鳍笛鲷 (Lutjanuserythopterus)、黄斑蓝子鱼 (Siganusoramia)等一些常见海水养殖鱼类的致病性 ,该菌能导致不同海水养殖鱼类死亡并表现一定程度的症状。     

四种海洋致病弧菌对抗生素敏感性的测定

测定了4种海洋致病弧菌对8种常用抗生素药物的敏感性．测试结果表明，鳗弧菌对氯霉素、庆大霉素具有敏感性，但对其他所测药物均表现出耐药性；副溶血弧菌对四环素、卡那霉素、青霉素表现出耐药性，而对氯霉素、头孢娄新、庆大霉素、红霉素和链霉素则表现出敏感性；河流弧菌对四环素、链霉素表现出耐药性，对氯霉素、卡那霉素、头孢娄新、庆大霉素、青霉素和红霉素则表现出敏感性；溶藻弧菌仅对四环素表现出耐药性，对其他7种抗生素均表现出敏感性．同时针对表现出抗药性的药物，相应地确定了它们的最小抑菌质量浓度值．     

网箱养殖大黄鱼弧菌病研究

1999年夏季,福建省宁德北斗都网箱养殖大黄鱼发生大面积死亡,从病鱼体内分离出两株细菌：ND-01和ND-02,人工感染试验证实这两株菌皆为大黄鱼的病原菌,经鉴定,菌株ND-01为溶藻弧菌,菌株ND-02为副溶血弧菌,51种药物的药敏试验表明;青霉素G、万古霉素等19种药物对ND-01没有抗菌作用,青霉素G、头孢拉定等10种药物对ND-02没有抗菌作用;ND-01对氯霉素、氟派酸等9种药物敏感,而ND-02则对氟派酸、氟嗪酸等10种药物敏感。     

紫外线和消毒剂协同杀菌作用的研究

采用紫外线和二氧化氮的协同杀菌作用对冻虾仁中的副溶血性弧菌进行控制,微生物学检验表明,紫外线和二氧化氯的协同作用比单独的紫外线和二氧化氯杀菌效果好,在协作作用中,消毒剂是主体,消毒剂的浓度和作用时间起主导作用,紫外线起协同作用。